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www.fun88.com:过氧化氢酶活性检测试剂盒(紫表吸取法)

发布时间:2022-01-26 08:02:06 来源:乐天fun88官网 作者:fun88备用官网

  (CAT)渊博存正在于动物、植物、微生物和造就细胞中,是生物演化进程中设立起来的生物防御体系环节酶,其要紧效力是催化生物体内的H₂O₂分析,使机体免受自正在基毁伤,正在活性氧根除体系中拥有紧急效用。

  H₂O₂正在240 nm处拥有特点招揽峰,过氧化氢酶或许分析H₂O₂,使反映溶液240 nm处吸光值随反适工夫而消浸,按照吸光值的蜕化率即可表征过氧化氢酶的活性。

  CAT检测做事液的摆设:操纵前取30 μL试剂二列入20 mL试剂一(或按比例摆设),充溢混匀,即为检测做事液,或按比例摆设,摆设后4℃可存在一周。

  测定进程中所需求的仪器和试剂:紫表分光光度计、1 mL石英比色皿(光径10 mm)、研钵/匀浆器、可调式移液器、台式离心术、恒温水浴/造就箱和蒸馏水。

  ①细菌或细胞:离心搜聚细菌或细胞到离心管内,遵照细菌或细胞数目(10⁴个):提取液体积(mL)为(500-1000):1的比例(创议500万细菌或细胞列入1 mL提取液)处罚样品,冰浴超声决裂(功率20%或200 W,超声3 s,间隔10 s,反复30次),4℃ 8000 g离心10 min,取上清置冰上待测。

  ②构造:遵照构造质料(g):提取液体积(mL)为1:(5-10)的比例(创议称取约0.1 g构造,列入1 mL提取液)处罚样品,冰浴匀浆,4℃ 8000 g离心10 min,取上清置冰上待测。

  ①紫表分光光度计预热30 min以上,治疗波长至240 nm,蒸馏水调零。

  ②测定前将CAT检测做事液置于37℃(哺乳动物)或25℃(其他物种)预热10 min。

  吸光值测定:充溢混匀并立地着手计时,立地测定240 nm处5 s时吸光值A1和65 s时吸光值A2,揣度ΔA=A1-A2。

  ①反映进程气泡过多声明酶活性过高,结果不妨为负值,创议将粗酶液操纵提取液恰当稀释后再举行测定;若稀释样本或反映编造没有产赌气泡仍旧呈现较幼的负值,阐述该样本测不到CAT活性;

  ③若ΔA大于0.2创议将粗酶液操纵提取液恰当稀释后再举行测定,支配ΔA幼于0.2或许确保反映进程弧线呈优秀线性,以升高检测确实性和聪颖度;

  ④为保障结果确实且避免试剂耗损,测定前请细致阅读仿单(以现实收到仿单实质为准),确认试剂积蓄和企图是否充溢,操作办法是否明白,且务必取2-3个预期分歧较大的样本举行预测定,进程中题目请您实时与做事职员合系。